SuperNova v428：新しいフローサイトメトリー用の高輝度蛍光色素

Arunkumar Easwaran, Massimiliano Tomasulo, Boi Hoa San, Mukesh Mudgal, Sergei Gulnik | Beckman Coulter Inc., Miami, FL, USA
Valérie Mallet Designe, Sylvain Monseaux | Beckman Coulter, Marseille, France

 

SuperNova v428のご紹介

SuperNova v428は、バイオレットレーザー（405 nm）で励起され、非常に明るく検出できる新しい水溶性ポリマー蛍光色素です。これは、PBSなどのリン酸緩衝液中での高い吸光係数（～300万Lmol-1 cm-1 ）と蛍光量子収率（～0.6）に起因します。このポリマーの最大励起は414 nm、最大発光は428 nmで（図1）、フローサイトメーターでは450/50バンドパスフィルタ、または同等のものを使用して検出が可能です。

Absorption and emission spectra (lexc = 405 nm) of SuperNova v428 in PBS. SuperNova v428 solution in PBS upon illumination using a UV lamp at 365 nm.

図 1 :（左）PBS中のSuperNova v428の吸収および発光スペクトル（λexc = 405 nm）
（右）365nmのUVランプを使用して照射したPBS中のSuperNova v428溶液

 

SuperNovaポリマー色素の合成と抗体への結合

SuperNova v428は、図2に示すように水溶性モノマーの重合によって調製され、高度に共役した蛍光骨格を形成します。キャッピングはポリマーに対して実行され、続いて適切な機能を使用して活性化され、抗体に結合できるポリマーが得られます。これらの活性化ポリマーは抗体に結合し、標準化された手順を使用して精製されます。

Schematic procedure for SuperNova v428 polymer synthesis, activation and conjugation process
図 2 : SuperNova v428ポリマーの合成、活性化、および接合プロセスの概略手順

 

ポリマー色素標識は通常、例えば単球などのFc受容体を発現する細胞に非特異的に結合することにより、著しい非特異的染色を生成する傾向があります。この非特異的な染色を最小限に抑えるために独自の製法が確認および最適化されており、SuperNova v428のStain Indexをさらに向上させることができます。

CD22-SNv428 whole blood staining before (left) and after (right) formulation with additives preventing non specific staining. Background on monocytes is significantly reduced.
図 3 : 非特異的染色を防ぐ添加剤を含む製法の前（左）と後（右）のCD22-SuperNova v428全血染色
単球のバックグラウンドが大幅に減少します。

 

フローサイトメトリーの結果

SuperNova v428を抗CD19、CD22およびCD25抗体に標識し、PE、Pacific Blue*、Brilliant Violet™ **ポリマー色素結合体をもちいてそれぞれ測定しました。抗体-SuperNova v428標識は、フローサイトメトリーでPacific Blue*よりも明るく（当社比）、PEおよびBrilliant Violet 421™ **同等の明るさを示しました。非特異的染色も低い傾向がみられました。

SuperNova v428 conjugates (with CD19, CD22, and CD25) compared against conjugates of BV421, PE and Pacific Blue in flow cytometry.
図 4 : フローサイトメトリーでBrilliant Violet 421™ **、PE、およびPacific Blue*の標識とSuperNova v428標識（CD19、CD22、およびCD25を含む）の測定結果
すべてのSuperNova v428標識は、高輝度を示し、非特異的結合が低いことが示されました。

 

リンパ球の
Stain Index		 単球のMFI
(バックグラウンド)
CD19 SuperNova v428 281 0.688
Brilliant Violet 421™ ** 191 1.533
PE 246 0.805
Pacific Blue* 48 0.600
CD22 SuperNova v428 172 1.033
Brilliant Violet 421™ **
 123 1.476
PE 136 0.716
Pacific Blue* 28 0.958
CD25 SuperNova v428 36 0.731
Brilliant Violet 421™ **
 14 2.021
PE 24 1.052
Pacific Blue* 6 0.522
表1 :SuperNova v428、Brilliant Violet 421™ **、PE、およびPacific Blue*で標識したリンパ球マーカーによる正常な全血を染色して得られたリンパ球のStain Indexおよび単球MFI（バックグラウンド）

 

結論

SuperNovaは、フローサイトメトリーアプリケーション向けの次世代のポリマー蛍光色素です。SuperNova v428は、抗体に結合し、非常に明るい結合体をもたらす独自の光物理的特性を備えています。独自の添加剤を活用した製法により、非特異的染色を最小限に抑え、フローサイトメトリー染色結果の信頼性を高め、Stain Indexを向上させることができます。したがって、SuperNova v428標識は、発現量が少なく、弱陽性の発現マーカーの研究に特に適しています。

本製品は研究用製品です。診断用にはご使用いただけません。
* Pacific BlueはThermo Fisher Scientific Inc.の登録商標です。
** Brilliant Violet™ はSirigen Group Ltd.の登録商標です。

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