細胞表面マーカーのサンプル調製と染色方法

I. 各種溶血手順フローチャート（ヒト全血）

1. Non-wash

2. Wash

Ⅱ.試薬･材料および検体

1. 試薬･材料

2. 検体

① ヒト全血

② ヒト骨髄サンプル

③ 単核細胞分離サンプル

④ リンパ節浮遊液

Ⅲ.直接免疫蛍光法（ヒト全血）

1.No-wash

（1）TQ-Prep

（2）OptiLyse B　--　B.D社フローサイトメーター用溶血試薬

（3）OptiLyse C　--　ベックマン・コールター社フローサイトメーター用溶血試薬

（4）VersaLyse　--　ベックマン・コールター社フローサイトメーター用溶血試薬

2.Wash

（1）TQ-Prep変法

（2）全血ライジングキット

（3）OptiLyse B　--　B.D社フローサイトメーター用溶血試薬

（4）OptiLyse C　--　ベックマン・コールター社フローサイトメーター用溶血試薬

（5）VersaLyse　--　ベックマン・コールター社フローサイトメーター用溶血試薬

（6）IOTest3　--　ベックマン・コールター社フローサイトメーター用溶血試薬(塩化アンモニウム溶血試薬）

Ⅳ. 直接免疫蛍光法（ヒト細胞浮遊液）

1. 細胞浮遊液の調製

2. 抗体染色

Ⅴ. 間接免疫蛍光法（ヒト細胞浮遊液およびヒト全血）

1. 細胞浮遊液の調製

2. 1カラー抗体染色

3. 2～10カラー解析（ビオチン標識抗体／蛍光標識抗体）

4. 2～10カラー解析（精製抗体／蛍光標識抗体）

Ⅵマウス、ラットのサンプル調製

1. マウス、ラットの細胞浮遊液の作製

2. 操作

①組織の摘出

②浮遊細胞の調製

a.細胞

b.胸腺細胞

c.リンパ節細胞