サンプル調製

ClearLLab 10Cドライ抗体パネル

リンパ系および骨髄系細胞を対象としたイムノフェノタイピングによる白血病・リンパ腫*（L&L）IVDアッセイ（FDA承認・CEマーク取得、日本では研究用試薬です。）

*ホジキンリンパ腫のみに対応

サンプル取得

コンパクト クリニカルフローサイトメーターDxFLEX**

13カラー***のマルチカラー解析が可能で、コンペンセーションが容易に行える新しい検出器技術を実装したDxFLEXで、ハイコンプレキシティ検査がより効率的かつ容易になります。

**コンパクトクリニカルフローサイトメーターDxFLEX
製造販売届出番号：13B3X00190000074
一般医療機器（特定保守管理医療機器、設置管理医療機器）
**米国では、DxFLEXはClearLLab 10C ドライ抗体パネルを使用した10カラーin vitro診断用として承認されていますが、日本ではClearLLab 10Cは研究用試薬です。。蛍光チャネル（FL11-FL13）、その他のすべてのアプリケーションも研究用です。

サンプル解析

 

Kaluza

フローサイトメトリー解析ソフトウエア

フローサイトメトリー解析ソフトウエア Kaluzaで、取得したデータから有意義な患者レポートを作成できます。

はじめに

フローサイトメトリーによるイムノフェノタイピング（FCI）は、血液リンパ系悪性腫瘍の貴重な診断ツールです¹。

フローサイトメーターDxFLEX *は、研究用の高感度なフローサイトメーターとしてご好評いただいているCytoFLEXファミリーの臨床用途版です。DxFLEXには、CytoFLEX ファミリーと同じアバランシェフォトダイオード（APD）技術が採用されています。この技術は、一般的な光電子増倍管（PMT）が使われているフローサイトメーターよりも感度が高く、ゲイン設定／電圧と測定された蛍光強度との間に線形相関があるため、ハイカラーフローサイトメトリー検査がより簡単に行えます^{2, 3}。

ClearLLab 10C**アプリケーションをDxFLEXフローサイトメーターと共に使用する多施設共同臨床試験で、DxFLEX ClearLLab 10Cのフルシステムとしての精度を検証しました。

* In the US, the DxFLEX flow cytometer is cleared for 10-color in vitro diagnostic use with the ClearLLab 10C Reagent System. Fluorescence channels FL11-FL13 and all other applications are for Research Use Only.

**米国において、ClearLLab 10Cドライ抗体パネルは、DxFLEXでの使用において510 (k) 承認および IVDR認証を受けていますが、日本においては研究用試薬です。

結果

‌ClearLLabコントロール細胞を用いた精度

ClearLLabコントロール細胞のアッセイシートに定義されているターゲット集団について、DxFLEX-ClearLLab10Cシステムでの診断精度の高さを評価しました。‌ClearLLab 10C B細胞、T細胞、M1、M2パネルで、ClearLLabコントロール細胞（正常細胞および異常細胞）の検査を行いました。‌各パネルから、正常、異常コントロール細胞をどちらも140採取し、Kaluzaソフトウエアで解析しました。
B細胞パネル全体でのターゲットポピュレーションの平均回収率は7.99%~97.92%、T細胞パネルでは2.77%〜97.83%、M1パネルでは7.70%~97.88%、M2パネルでは7.96%~98.03%でした。
それぞれのターゲットポピュレーションで、全体の繰り返し可能性は正常細胞、異常細胞とも0.24% CV～5.56% CVの範囲であり、再現性は1.00% CV～16.93% CVの範囲でした。
‌異常細胞コントロールを用いて各パネルから得た結果の代表的な例を、Table 1（B細胞パネル）、Table 2（T細胞パネル）、Table 3（M1パネル）、Table 4（M2パネル）に示します。
‌データは示していませんが、正常細胞ClearLLabコントロールでは同等の性能を示しました。
さらに、各施設に設置されているDxFLEX装置間の再現性は 0.01% CV～9.49% CV、装置内のばらつきは0.02% CV～12.16% CVと、精度性能は十分に高い結果となりました。

臨床検体を使用した測定での精度

ClearLLab 10Cドライ抗体パネルは、4パネルとも、フェノタイプが正常な全血検体と異常な全血検体の両方をターゲットとして評価を行いました。 Table 5 にまとめたターゲットポピュレーションについて、フェノタイプアセスメントで評価しました。

Table 5. 評価を行ったターゲットポピュレーション

本試験では、定性的結果と定量的結果の両方を評価しました。‌3人のオペレーターが2台のDxFLEXより得たデータの定量評価では、ClearLLab 10C B細胞パネルからのターゲットポピュレーションの平均回収率は8.84% ～ 91.55%、T細胞パネルでは2.20 ～ 80.62%、M1パネルでは6.22% ～ 57.46%、 M2パネルでは2.85%から62.79%の範囲となりました。 Table 6に、ClearLLab 10C B細胞パネルで得た代表的な結果と、各ターゲットポピュレーションの繰り返し可能性に関する統計情報（平均、SD、%CVなど）をまとめます。また、測定間、装置間、オペレーター間、サンプル内のSDおよび%CVも示します。

同様に、ClearLLab 10C T細胞パネル、M1パネル、M2パネルの結果が繰り返し得られる可能性は、全体で8%CV 未満であり、測定間、装置間、オペレーター間、サンプル内のCVは13%未満でした（データは示していません）。

定性的評価で、DxFLEX 10Cドライ抗体パネルは、フェノタイプが正常な検体および異常な検体のいずれにおいても、2台の DxFLEX装置間および3人のオペレーター間での一致度が100%でした。 Table 7 ～ Table 10に、ClearLLab 10C B細胞、T細胞、M1およびM2の各パネルについて、陽性（異常）、陰性（正常）、全体一致度をまとめます。

Table 7. ClearLLab 10C B細胞パネルの定性的結果。

Table 8. ClearLLab 10C T細胞パネルの定性的結果。
*Note:正常な検体のみを採取したため、全体の一致率と陰性の一致率が同じになっています。

Table 9. ClearLLab 10C M1パネルの定性的結果。

Table 10. ClearLLab 10C M2パネルの定性的結果。

考察と結論

DxFLEX-ClearLLab 10Cシステムの精度性能について、ClearLLabコントロール細胞（正常・異常）をコントロールとして使用し、複数の外部施設で評価しました。ClearLLab 10Cアプリケーションの全4パネルで得られた各ターゲット集団の定量的結果から、正確性の低かったものは、各施設内（繰り返し可能性：CV < 10%、同機器でのばらつき： CV < 13%）および施設間（繰り返し可能性：CV < 6 %、再現性:CV < 17 %）とも十分に許容される6範囲となりました。

臨床検体を用いた試験でも、使用目的に応じた臨床アプリケーションについて、精度性能が定量的（再現性：CV<8%、サンプル中：CV<13% ）および定性的（100 %一致）に要件を満たすことが示されました。

DxFLEX 10カラー システムに関連する、検査室間で起こり得る全てのばらつき（マニュアルでのサンプル調製、データ解析、オペレーター間、機器間）を考慮した結果、ここに示した精度性能は、臨床検査室でのお客様のニーズを満たすことができるものであると言えるでしょう。

参考文献

1. Craig, F. E. and K. A. Foon (2008). "Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasms." Blood 111(8): 3941-3967.
2. Hedley BD, Cheng G, Keeney M, et al. A multicenter study evaluation of the ClearLLab 10C panels. Cytometry Part B: Clinical Cytometry. Published online 2020.
3. Lawrence WG, Varadi G, Entine G, Podniesinski E, Wallace PK. Enhanced Red and Near Infrared Detection in Flow Cytometry Using Avalanche Photodiodes. Cytometry A. 2008;73(8):767-776. doi:10.1002/cyto.a.20595
4. CLSI. Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Procedure; Approved Guideline-Third Edition. CLSI document EP05-A3. Wayne, PA: Clinical Laboratory Standard Institute; 2014.
5. CLSI. User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline – Third Edition. CLSI document EP12-Ed3. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standard Institute; 2023.
6. Wood, B., Jevremovic, D., Béné, M. C., Yan, M., Jacobs, P., Litwin, V., & on behalf of ICSH/ICCS Working Group. (2013). Validation of cell-based fluorescence assays: Practice guidelines from the ICSH and ICCS – part V – assay performance criteria. Cytometry Part B: Clinical Cytometry, 84(5), 315-323. doi:https://doi.org/10.1002/cyto.b.21108.