rAAVベクターの同質性や純度などを測定する方法：溶液中のウイルス粒子を分析

組換えアデノ随伴ウイルス（rAAV）ベクターを用いた遺伝子治療は、患者の命を救う新たな治療法として大いに期待されています。

しかし、電子顕微鏡やサザンブロット法などの従来の分析技術は、rAAVの不均一性や凝集度合は評価できますが、同質性やウイルス粒子を定量するには十分な分解能がありません。さらに、臨床グレードのrAAVベクターの製造では、高分解での分析が求められています。

製品開発の初期段階では開発に伴う不確定要素が多く存在するため、遺伝子治療の研究者は、「研究開発の早期に失敗すること」が重要であると認識しています。製品開発をコントロールできるかどうか知ることが主な理由です。しかしながら、臨床グレードのrAAVベクターの製造に至っては、通常の技術でその評価レベルに到達することはなおさら困難でした。

開発が困難な最大の原因は、臨床に適用可能な品質の評価方法と、高分解能で定量する技術がなかったことです。以下の項目が主要な課題でした。

• 同質性
• 純度
• 製剤のばらつきがないこと
• ウイルス粒子の定量

新しい分析方法：分析用超遠心機（AUC）による溶液中分析

Genethon社などの研究者は、AUCの使用によりrAAVベクターをマトリックスなし（血清型の種類や導入遺伝子に関わらず）で分析できることを発見しました。AUCを用いることにより、以下のことが可能になります：

• ウイルスの形成状態、同質性（空の粒子、完全粒子、オリゴマー）の評価
• 凝集度合の定量
• コンタミネーションの有無の確認
• 沈降係数を利用してウイルス粒子の内包DNAの長さを評価

Genethon社のCristine LE BECのチームが、AUCを用いることでscAAVベクターおよびssAAVベクターの品質を評価における課題を、どのようにして克服したか、こちらのWebセミナーで解説しています。