DRAQ7サンプルデータ
DRAQ7はさまざまな用途に対応しており、幅広い装置プラットフォームの既存のプロトコルに対し優れた適合性を持っています。
- 死細胞や透過性細胞のdsDNA/核を迅速に染色
- 生細胞用色素と組み合わせて死/生細胞を区別可能
- 簡単使用 - 洗浄・RNアーゼ不要
- GFPおよびFITC標識での使用に最適 - DRAQ7は遠赤外線領域で蛍光
- IF/IHC、ハイコンテントスクリーニング、細胞ベースアッセイに最適な遠赤外DNA対比染色剤
スペクトル特性:
- 蛍光発光波長は665 nmから近赤外線域まで
- 推奨される最適な励起フィルターは695LP、715LP、780 LPなど
- 卓上フロー&レーザースキャンサイトメーターおよび落射蛍光&非UV共焦点顕微鏡に光学的に適合
- 488 nm、568 nm、633 nm線の準最適波長に加え、最適波長647 nmにより励起。ヨウ化プロピジウムと異なりUV励起なし。
- フローサイトメトリーでは、一般的なFITC/GFP + PEの組み合わせにより補正不要。さまざまな生細胞色素を併用可能。
- UVおよび可視光域の蛍光色素との組み合わせにより多線撮像/サイトメトリーに対応
- DNA結合時に見かけの蛍光増強なし
- 通常は光退色なし
スペクトルプロファイル:
以下のグラフに、各種励起波長域について、水溶液中のDRAQ7の標準吸光スペクトルおよび蛍光発光スペクトルを示します。グラフに示すように、DRAQ7は488 nmシステムで効率的に励起できます。以下の場合には、できるだけ多くの放出光子を捉えるため、ロングバンドパスフィルターを使用することが推奨されます。
励起:
- 最適線:633および647 nm(Exλmax 599/644 nm)
- 準最適線:488、514、568 nm(フローサイトメトリーのみ)
発光:
- 665 nm超から赤外域(800 nm超)(dsDNA介在時Emλmax 678 nm/694 nm)
- 可視光域での重複は最低限(GFPとFITCなど)
- 発光フィルターは695LP、715LP、725 BP 20、780 LPなど
DRAQ7の侵入・標識化対象は膜の破壊された細胞のみ。
以下のフローサイトメトリーデータに、ヒトジャーカット細胞を24時間0.1~2.0 µMスタウロスポリンに曝露させた場合のアポトーシス(膜の破壊によりDRAQ7が侵入可能)について、陰性対照と比較して示します。
DRAQ7をAnnexin Vなどの試薬、ミトコンドリア膜プローブ、その他のセルヘルスレポーターと組み合わせて、フローサイトメトリー分析において膜の破壊された細胞に標識を付けることができます。一般に、アポトーシスの進行についての情報を得るには、無傷生細胞不透過性DNA色素とAnnexin V(膜の反転を検出)を併用します。下図に示すように、DRAQ7(上段および中段)はヨウ化プロピジウム(PI、下段)と同様に働き、VP-16の用量増加によって引き起こされた膜の漏出性の発現を検出しました。さらに、DRAQ7は、遠赤外域の非増強DNA結合色素としての可能性も秘めています。対数表示と直線表示を併用することで、部分集団をさらに区別できるようになります。またPIとは異なり、DRAQ7では、複数の蛍光パラメーターを並行して測定できます(青色レーザーによる励起では4個)。
DRAQ7は、アポトーシスアッセイ、細胞毒性アッセイ、細胞溶解抗体検査、セルヘルスアッセイに使用可能です。
シグナルを遠赤外域で放出するため、DRAQ7その他の複数の蛍光粒子と容易に組み合わせることができ、単一の488 nm励起光源(アルゴンイオンレーザー)の場合最大4つの蛍光粒子と併用できます。